榮曄生物按照《榮曄生物質量管理手冊》對牛血清生產過程中涉及的包材、原料、工藝用水、輻照驗證等進行無菌、大腸桿菌噬菌體、支原體、細胞病毒等微生物檢測,全面保障產品的生物安全。
檢測項目 | 檢測方法 | 適用環節 | |
病毒 | 細胞病毒 | 細胞培養法 | 成品、原料、驗證 |
血吸附實驗 | |||
免疫熒光抗體法 | |||
熒光定量PCR法 | |||
大腸桿菌噬菌體 | 增殖噬斑法 | 成品、原料、工藝用水、驗證 | |
支原體 | 培養法 | 成品、原料、驗證 | |
DNA熒光染色法 | |||
PCR法 | |||
無菌 | 細菌 | 薄膜過濾法 | 成品、PET瓶、采血袋、驗證 |
真菌 |
1.細胞病毒檢測
1.1 細胞培養法: 通過觀察細胞形態、生長情況判斷細胞病變情況,以檢測致細胞病變的病毒。 | 1.2 紅細胞吸附法: 通過觀察雞和豚鼠紅細胞在細胞表面的吸附和凝集情況,檢測致紅細胞 凝集的病毒。 | ||
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細胞培養法-陰性 | 細胞培養法-陽性 | 紅細胞吸附法-陰性 | 紅細胞吸附法-陽性 |
1.3 熒光抗體法(直接法)
利用經熒光標記的特異性抗體對細胞染色,通過觀察細胞有無特異性熒光,檢測樣品中是否含有相應的病毒抗原,具有敏感性高、特異 性強等優點,適合牛腹瀉病毒、牛腺病毒、牛細小病毒、牛副流感病毒、呼腸孤病毒、狂犬病毒等病毒檢測。
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熒光抗體法-REO3陰性 | 熒光抗體法-REO3陽性 | 熒光抗體法-BAV陰性 | 熒光抗體法-BAV陽性 |
1.4 熒光定量PCR法
目前最靈敏的檢測方法,根據目標核酸基因設計引物,實現對靶標的檢測。在PCR反應體系中加入熒光基團,通過熒光信號不斷累積而實現實時監測PCR全 程,然后通過標 準曲線對未知模板進行定量分析。
2.支原體檢測
為避免單一支原體檢測方法的局限性,榮曄生物結合培養法、DNA熒光染色法和PCR法對血清產品進行綜合定性支原體檢測。
2.1培養法 支原體檢測的金標方法,藥典推薦的方法,假陰性概率小,檢測精度高。 | 2.2DNA熒光染色法 作為培養法的補充方法,通過DNA染料對樣品處理過的指示細胞進行染色后,能夠快速、準確地檢測出細胞中支原體的污染。 | 2.3 PCR法 快速靈敏,特異性高。通過對支原體特定的序列設計引物,當存在支原體污染時通過PCR特異性擴增,將目標DNA特異性復制,擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳,陽性會顯示特異性大小的條帶。 |
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3.無菌性檢測
采用先進的無菌隔離設備,以過氧化氫滅菌系統對檢測物料進行預滅菌,為無菌檢查提供完全隔離、持續有效的高潔凈空間,最大限度的降低微生物污染風險,在無菌隔離器提供的無菌環境中,利用孔徑為0. 22μm 的全封閉式無菌過濾系統對樣品里的微生物進行截留,檢測樣品的無菌性 。
4.大腸桿菌噬菌體檢測